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最新生物化学实验教学大纲

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精品文档 《生物化学》实验教学大纲 2007 1、课程属性:必修 2、实验属性:非独立设课 3、学时学分:实验学时 22 4、实验应开学期:秋季 5、先修课程:有机化学、分析化学、普通化学 一、课程的性质与任务 生物化学实验课是在学*生物化学理论课的基础上进行的一个实践性环节,本课程的教 学任务是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象,及综合运用已学过的理论知 识设计实验或进行综合性的实验,巩固和加深对生物化学课程中基本理论知识的理解,训练 学生理论知识的运用能力、实验操作技能、实验数据的处理和分析能力。 二、实验目的与基本要求 本实验课配合理论教学,通过实验从实践中进一步学*,掌握和运用学过的基本理论; 运用生物化学理论分析实验过程中的各种现象和问题,培养、训练学生的分析和解决问题的 能力。 学生必须完成的基本要求:准备实验,预*实验;写出预*报告,拟定记录表格;测取 实验数据;整理实验数据;写出实验报告。 三、实验考核方式及办法 考核方式:考查;实验成绩占总成绩的 30%,实验成绩评分办法:实验操作占 40%, 实验态度占 20%,实验报告占 40%。 四、实验项目一览表 生物化学实验项目一览表 序 实验项目名称 实验类型 实验要求 适用专业 学时 号 1 血清球蛋白的分离--分子筛凝胶层析法 验证性 必做 农科类 4 2 醋酸纤维薄膜电泳法分离动物血清蛋白质 验证性 必做 农科类 3 3 血清乳酸脱氢酶同工酶的分离与测定 综合性 必做 农科类 3 4 动物肝脏 DNA 的提取 验证性 必做 农科类 3 5 紫外吸收法测定核酸含量 综合性 必做 农科类 3 6 应用纸层析法鉴定酶促转氨基作用 综合性 必做 农科类 3 7 维生素 C 含量的测定 综合性 必做 农科类 3 精品文档 精品文档 五、实验项目的具体内容 实验一 血清球蛋白的分离 ------分子筛凝胶层析法 1、本次实验的目的和要求 学*和掌握分子凝胶层析法的原理和技术(溶胀,装柱,加样和洗脱),了解葡聚糖 凝胶的选用原则 2、实验内容或原理 分子筛指的是一些多孔介质。当含有不同大小分子的混合物流经这一介质时,小分子的 物质能进入介质的孔隙,而大分子的物质则被排阻在介质之外,从而达到分离的目的,这种 作用称为分子筛效应”。当用含有硫酸铵和球蛋白的混合物进行上样时,球蛋白最先被吸脱 下来,硫酸铵后被吸脱下来,从而达到分离的目的。 3、需用的仪器和试剂 层析柱、试管、铁架台、恒压瓶 饱和硫酸铵、10%氢氧化钠、1%硫酸铜、1%氯化钡 4、实验步骤 凝胶的预处理、装柱、 盐析、上样收集、鉴定、数据处理; 5、教学方式 学生为主,教师辅助,充分预*,独立完成。结合多媒体幻灯演示 6、考核要求 以出勤、随堂提问、实验报告和预*报告等*时成绩为主要考核内容 7、实验报告要求 实验报告应包括下列各项: (1)报告的题目(要简明确切); (2)写报告人及共同测定人员的姓名; (3)实验目的; (4)实验原理; (5)实验仪器和试剂(包括主要仪器的规格、主要试剂的名称); (6)实验数据记录(包括原始数据记录表格和整理后的数据记录表格); (7 实验结果。明确提出本次实验的结论,用公式计算或用文字说明 (8)分析与讨论,要对实验结果作出估计,分析误差大小及原因,对实验中发现的问题 应进行讨论,对实验方法、实验设备有何改进建议也可写入此栏; (9)回答思考题。 实验二 醋酸纤维薄膜电泳法分离动物血清蛋白质 1、本次实验的目的和要求 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理,操作及测定动物蛋白质的相对百分含量技术 精品文档 精品文档 2、实验内容或原理 蛋白质是两性电解质,在 pH 值大于其等电点的溶液中成为带负电的阴离子,在电场中 移向阳极。血清中的数种蛋白质在同一 pH 条件下由于其解离状况不同、,带点不同,在电 场中移动速度不同,采用电泳法可将其分离。醋酸纤维素是纤维素羟基乙酰化形成的纤维素 乙酰酯将它溶于有机溶剂后,涂抹成均匀的薄膜待溶剂干后即称为醋酸纤维薄膜。 3、需用的仪器和试剂 水*电泳装置、培养皿、试管、电泳仪 、电泳槽、 0.07mol/L 巴比妥-巴比妥钠缓冲液、氨基黑 10B、漂洗液、透明液 4、实验步骤 (1)醋酸纤维薄膜的润湿和选择 (2)制作电桥:将缓冲液倒入电泳槽中,根据电泳槽的纵向尺寸,于两极支架上各放入三 层滤纸,滤纸的一端与支架的前端对齐,另一点进入缓冲液中,除去气泡使滤纸紧贴于支架 上,即为纸滤桥。 (3)点样:无光泽面朝上,在距负端 1.5cm 处,盖玻片点样注意点样时应使血清均匀的分 布在点样区形成有一定宽度粗细均匀的直线,这是获得重要清晰区带电泳图谱的重要环节之 一。可事先在滤纸上练*点样。 (4)电泳:将点好样的薄膜无光泽面向下,两端贴在电泳槽支架的滤纸上,点样端在负极。 *衡 10min ,调电压最大,然后调电流,0.6mA/条,预电泳 10min,调电流 1mA/条,电泳 45min 关闭电源.注意电泳过程中防止电压偏高或偏低. (5)电泳完毕,取出薄膜直接浸入染色液(.氨基黑 10B)中,染色五分钟 (6)漂洗:漂洗液漂洗直至背景染色脱去呈白色,可看出清晰的五条区带. (7)记录:由正极依次为清蛋白、α 1-球蛋白、α 2-球蛋白、β -球蛋白、γ -球蛋白。记 下迁移距离。 (8)透明:甲液2min,乙液1min,宁缺毋滥。取出薄膜贴于载玻片上放置于阴凉处晾干备 用 5、教学方式 学生为主,教师辅助,充分预*,独立完成。 6、考核要求 同上 7、实验报告要求 实验报告应包括下列各项: (1)报告的题目(要简明确切); (2)写报告人及共同测定人员的姓名; (3)实验目的; (4)实验原理; (5)实验仪器和试剂(包括主要仪器的规格、主要试剂的名称); (6)实验数据记录(包括原始数据记录表格和整理后的数据记录表格)



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